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小鼠腦組織解離試劑盒使用方法

更新時間:2025-02-25點(diǎn)擊次數(shù):373

百奧益康小鼠腦組織解離試劑盒貨號:BA3305適用于小鼠腦組織的細(xì)胞懸液的分離制備,本產(chǎn)品利用酶溫和、快速有效地破壞細(xì)胞外基質(zhì),釋放細(xì)胞,從而生成單細(xì)胞懸浮液。制備的單細(xì)胞懸液可用于單細(xì)胞測序、細(xì)胞培養(yǎng)或其他細(xì)胞相關(guān)檢測。百奧益康小鼠腦組織解離試劑盒貨號:BA3305怎么使用呢?讓我們一起來看看小鼠腦組織解離試劑盒的使用方法吧!

一、材料準(zhǔn)備

1. 儀器:水浴鍋(定期手動搖晃混勻)或雜交爐(轉(zhuǎn)速 20 ~ 30 轉(zhuǎn)/分鐘)、水平離心機(jī)。

2. 試劑:PBSFBS、RPMI 1640 培養(yǎng)基。

3. 耗材:低吸附槍頭、離心管、20 μm 70 μm 的細(xì)胞篩。

二、操作步驟

準(zhǔn)備工作:水浴鍋或雜交爐設(shè)置到 37℃、配制含 5% FBS PBS。 切取新鮮組織約 200 mg(黃豆粒?。?,如圖 1

小鼠腦組織解離試劑盒使用方法

1 新鮮組織樣圖

1. 取一個5 mL 離心管,加入2160 μL Buffer A,放入用PBS 清洗干凈的組織樣本,并剪碎。

2. 添加800 μL Enzyme B 10 μL Enzyme C,顛倒混勻。

3. 放在37℃水浴鍋或雜交爐中20 ~ 30 min。消化過程中,使用水浴鍋每隔3 ~ 5 min 手動搖晃混勻。使用雜交爐轉(zhuǎn)速20 ~ 30 轉(zhuǎn)/分鐘左右。

4. 每隔3 ~ 5 min 質(zhì)檢一次細(xì)胞懸液,根據(jù)細(xì)胞總量及活性等確定消化停止時間。

5. 消化完成后,用70 μm 細(xì)胞篩進(jìn)行過濾,收集濾液于新的15 mL 離心管中。

6. 3 mL RPMI 1640 培養(yǎng)基或 5% FBS PBS 于消化的離心管中,上下顛倒涮洗管壁,涮洗液同樣經(jīng)過同一個70 μm 細(xì)胞篩進(jìn)行過濾,收集濾液于第5 步的15 mL 離心管中。

7. 將收集液于4℃300 ×g 離心5 min,棄上清。

8. 5 mL 5% FBS PBS 重懸沉淀,吹打混勻。

9. 放入水平離心機(jī),4℃300 ×g 離心5 min,棄上清。

10. 用含5% FBS PBS 重懸沉淀至2 mL。

11. 加入1 mL DRS(細(xì)胞碎片去除緩沖液),用5 mL 移液器緩慢吹打混勻10 次。不要渦旋振蕩。

12.沿管壁緩慢加入3 mL PBS,輕輕覆蓋在最上層,千萬不要混勻,如圖2。

小鼠腦組織解離試劑盒使用方法

        圖2                                                                 3

13. 務(wù)必使用水平離心機(jī),并設(shè)置為居中的加速度和減速度,4°C,3000 ×g,離心20 min

14. 離心后,緩慢取出離心管。溶液分成3 層。緩慢吸出全部上清液(優(yōu)先吸出碎片層),保留細(xì)胞沉淀(上清盡量wan-quan去除干凈),如圖3 和圖4

注:離心管要輕拿輕放,確保分層明顯,不同層的溶液間不互相混合。

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4 小鼠腦細(xì)胞碎片去除示意圖

15. 向沉淀中加入適當(dāng)體積的含5% FBS PBS,加入三倍體積的紅細(xì)胞裂解液(BA3311),冰上裂紅5 min。具體可以參考BA3311 紅細(xì)胞裂解液說明書。

16. 加入等體積的PBS 混勻,終止裂紅,4°C,450 ×g,離心5 min,棄上清。

17. 10 mL 5% FBS PBS 重懸沉淀,吹打混勻,4℃,300 ×g 離心5 min,棄上清。

18. 50 µL ~ 2 mL 5% FBS PBS 重懸沉淀,根據(jù)所需的細(xì)胞濃度調(diào)整重懸液的體積。

19. 若有明顯細(xì)胞結(jié)團(tuán),則使用20 μm 細(xì)胞篩進(jìn)行過濾,收集濾液于新的離心管中。若無明顯細(xì)胞結(jié)團(tuán),則可跳過此步驟。

20. 用細(xì)胞計數(shù)儀對細(xì)胞懸液進(jìn)行質(zhì)控并記錄。質(zhì)控結(jié)束后請立即進(jìn)行后續(xù)實驗。

在使用的過程中,請按照百奧益康小鼠腦組織解離試劑盒貨號:BA3305的使用方法來進(jìn)行使用,若有任何問題,請聯(lián)系百奧益康試劑盒代理——北京百奧創(chuàng)新科技有限公司!

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